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新聞資訊

色譜柱的保養(yǎng)及應(yīng)用

色譜作為種分離方法,現(xiàn)在已經(jīng)成為分析化學(xué)學(xué)科中的個(gè)重要的分支?茖W(xué)技術(shù)的發(fā)展,使得色譜技術(shù)也得到進(jìn)步的發(fā)展,不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應(yīng)用。生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展,也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對(duì)研究的對(duì)象進(jìn)行定性和定量的研究。     色譜柱的相關(guān)性質(zhì)     

色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)    1.色譜柱的維護(hù)。在使用中,應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象,造成這種現(xiàn)象的主要原因是:①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進(jìn)樣器等中的不溶物④柱內(nèi)不溶物的形成等。如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對(duì)色譜柱進(jìn)行修復(fù)。試劑)應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑(如水)進(jìn)行沖洗。先:使用含鹽緩沖液后(如離子對(duì)其次:先斷開檢測(cè)器,然后用對(duì)來自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗,對(duì)于反相色譜柱,可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等,在此條件下,應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。后:如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù),色譜柱壓力還是沒有下降,則要斷開檢測(cè)器,將色譜柱反方向放置,然后檢查柱壓,若壓力穩(wěn)定下降,則保持色譜柱反方向連接,用低于0.5ml/min流速?zèng)_洗小時(shí)。如果壓力不下降,則要看內(nèi)置過濾器是否被堵塞,如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換,若端的填料發(fā)生堵塞,柱子將不可能被徹底恢復(fù),只能通過去掉端的部分填料,重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm。

2.色譜柱的保養(yǎng)。色譜柱在使用前,好進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。我們要根據(jù)不同的情況對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng):①反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng):使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷    ②長期保存色譜柱:如色譜柱要長時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買新色譜   

3.色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在高壓液相色譜中的應(yīng)用     不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:     3.1反相柱分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC),異丙醇(HPLC),二氯甲烷(HPLC)等溶劑作為流動(dòng)相,依次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。     3.2正相柱分別用正己烷(HPLC),異丙醇(HPLC),二氯甲烷(HPLC),甲醇(HPLC)等溶劑做流動(dòng)相,順次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。     3.3離子交換柱長時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。     另外,還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調(diào)回來,但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。 



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